貨號(hào)：Y9220L

品名：RNAse H

產(chǎn)品描述：

腸桿菌  RNA酶H（rnh）是降解RNA / DNA雜交分子的RNA鏈的內(nèi)切核糖核酸酶。RNA酶H消化產(chǎn)生具有5-磷酸和3-羥基末端的核糖核苷酸分子。RNA酶H對(duì)單鏈或雙鏈RNA分子幾乎無(wú)活性。

蛋白質(zhì)來(lái)源

重組大腸桿菌菌株攜帶的RNase H（RNH）基因來(lái)自E.coli。

補(bǔ)充：
20mM Tris-HCl 
100mM KCl 
10mM MgCl 2
0.1mM EDTA 
0.1mM DTT 
50％甘油
pH7.7 25℃

隨附：

B9220（10X RNAse H緩沖液）

10X RNAse H緩沖液（B9220）：
500mM Tris-HCl 
750mM KCl 
30mM MgCl 2
100mM DTT 
pH 8.3在25℃

單位定義
1單位定義為在37℃下20分鐘內(nèi)將來(lái)自3 H-標(biāo)記的DNA：RNA雜交分子的1nmol RNA水解為酸溶性物質(zhì)的酶的量  。

質(zhì)量控制分析

單位表征測(cè)定法
使用2倍系列稀釋法測(cè)定比活性。在1X RNAse H反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行酶稀釋，并加入含有3 H-標(biāo)記的聚（rA），聚（dT）DNA和1X RNAse H緩沖液的50μL反應(yīng)物中  。將反應(yīng)在37℃孵育20分鐘，在冰上浸入，并分析TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放。

蛋白質(zhì)濃度（OD 280）測(cè)量  使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標(biāo)準(zhǔn)化的Nanodrop ND-1000分光光度計(jì)
在OD 280處分析2.0μL酶樣品并用產(chǎn)品儲(chǔ)存溶液沖切。使用消光系數(shù)40,540和分子量18,053道爾頓將觀察到的3個(gè)重復(fù)樣品的平均測(cè)量值轉(zhuǎn)換成mg / mL。

SDS-Page（物理純度評(píng)估）
將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的樣品的1:100稀釋物。電泳后，將凝膠染色并比較??樣品以確定物理純度。該測(cè)試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量，確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99％。

污染測(cè)試

單鏈核酸外切酶活性
將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μl反應(yīng)液在37℃下孵育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放少于5.0％。

雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μl反應(yīng)液在37℃下溫育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放少于1.0％。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳確定沒有肉眼可察覺地轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。

大腸桿菌  16S rDNA污染測(cè)試
重復(fù)5μL酶溶液樣品變性，并在TaqMan qPCR測(cè)定中篩選污染性 大腸桿菌  基因組DNA，使用對(duì)應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測(cè)試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無(wú)模板對(duì)照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)（C t）。基于無(wú)模板對(duì)照 Ct  值與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，該測(cè)定的檢測(cè)限為<10拷貝基因組/樣品。

使用RNAse Alert kit（Integrated DNA Technologies），按照制造商的指導(dǎo)原則，篩選非特異性RNAse測(cè)定產(chǎn)物的非特異性RNA酶污染。

部分產(chǎn)品信息：

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