ZeptoMetrix 0801223說(shuō)明書(shū)

Goat IgG ELISA預(yù)期用途
免疫-TEK山羊IgG酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒是一種快速、易用的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒。*
設(shè)計(jì)用于
山羊初乳、牛奶、血清、血漿或其他生物液中山羊IgG的測(cè)定該分析包含可供使用的
試劑和執(zhí)行時(shí)間不到兩小時(shí)。試劑盒中的微孔板和檢測(cè)抗體
特別平衡，與山羊IgG的所有亞類(lèi)反應(yīng)均勻。
*僅用于研究目的。不用于體外診斷。
測(cè)試原理
微孔板威爾斯涂覆多克隆抗體山羊IgG形成捕獲階段的測(cè)定。這些抗體結(jié)合在一起
均勻地對(duì)山羊IgG的所有亞類(lèi)。捕獲的山羊IgG與檢測(cè)抗體反應(yīng)，檢測(cè)抗體是一種多克隆的抗山羊抗體。
與辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合。該試劑也與山羊IgG的所有亞類(lèi)反應(yīng)均勻。酶
然后用四甲基聯(lián)苯胺作為底物來(lái)定量井內(nèi)的活性。
試劑
供應(yīng)材料：
微孔板（1X96孔）：涂有純化兔抗山羊IgG的條帶
檢測(cè)抗體（12 ml）：含有共軛兔抗山羊IgG過(guò)氧化物酶
山羊IgG標(biāo)準(zhǔn)品（7毫升）：含有山羊IgG和分析稀釋劑
分析稀釋液（100 ml）：含有PBS、Triton X-100®
和2-氯乙酰胺
平板清洗緩沖液（125毫升）：含有PBS，Tween 20？
和2-氯乙酰胺
基質(zhì)（12 ml）：含有四甲基聯(lián)苯胺（TMB）
停止溶液（12 ml）：專(zhuān)有技術(shù)配方
微孔板封閉劑（1 pk）：每包10個(gè)封閉劑
塑料袋（1袋）：用于存放未使用的微孔板條。
？Triton X-100是陶氏化學(xué)公司的注冊(cè)商標(biāo)。
Tween 20是ICI Americas，Inc.的注冊(cè)商標(biāo)。

所需但未提供的材料：
個(gè)人防護(hù)設(shè)備（一次性手套、實(shí)驗(yàn)室外套、安全眼鏡等）
蒸餾水或去離子水
量筒和燒杯
準(zhǔn)備樣品和IGG標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的試管和試管架
經(jīng)驗(yàn)證的可調(diào)節(jié)微量移液管和，單通道和/或多通道
計(jì)時(shí)器
在18-25攝氏度下驗(yàn)證的培養(yǎng)箱或溫控室
吸水紙巾
有效測(cè)量450nm光密度的微板閱讀器
自動(dòng)微孔板清洗機(jī)或手動(dòng)真空吸塵設(shè)備
繪圖紙或計(jì)算機(jī)繪圖軟件

存儲(chǔ)
在2-8°C下儲(chǔ)存所有試劑盒。不要冷凍。未使用過(guò)的微孔板條應(yīng)保存在密封袋中，并使用干燥劑
盡量減少受潮。所有儲(chǔ)存和正確處理的試劑至少在打印的有效期之前是穩(wěn)定的。
工具箱標(biāo)簽。
注意事項(xiàng)
在進(jìn)行分析之前，仔細(xì)閱讀所有說(shuō)明。
處理套件組件和試樣時(shí)，應(yīng)采取通用預(yù)防措施。**
為避免交叉污染，對(duì)每個(gè)樣品使用單獨(dú)的移液管。
當(dāng)測(cè)試潛在感染性樣本時(shí)，遵守所有適用的地方、州和聯(lián)邦法規(guī)
生物危險(xiǎn)品的處置。
停止溶液含有鹽酸，可能導(dǎo)致嚴(yán)重?zé)齻Ｈ绻佑|到眼睛或皮膚，請(qǐng)沖洗
立即用水并尋求醫(yī)療救助。穿防護(hù)服和護(hù)目鏡。
**MMWR，1988年6月24日，第37卷，第24號(hào)，第377-382、387-388頁(yè)。
試劑的制備
洗板緩沖器
使用前，在蒸餾水或去離子水中稀釋10倍1:10的洗板緩沖液。充分混合。準(zhǔn)備1X洗板緩沖液
可在2-8℃下儲(chǔ)存一周。如有以下情況，可訂購(gòu)額外的10x洗板緩沖液（ZMC目錄：0801060）
需要。
山羊IgG標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：
在6個(gè)試管上貼上標(biāo)簽，如下所示。山羊IgG標(biāo)準(zhǔn)（125 ng/ml）應(yīng)在分析稀釋劑中稀釋?zhuān)灾苽?br />標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如下表所示。

樣品稀釋?zhuān)?br />山羊血清通常含有20毫克/毫升的IgG抗體。測(cè)定稀釋液中山羊血清的1:2500～30萬(wàn)稀釋度
建議進(jìn)行初始測(cè)試。為了減少稀釋誤差，建議采用三個(gè)稀釋步驟。例如，三個(gè)1:65折疊
連續(xù)稀釋?zhuān)渲?0μl添加到640μl分析稀釋劑中，是一種方便的稀釋方案。
終用戶(hù)必須估計(jì)來(lái)自其他生物流體的山羊IgG濃度，以便進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尅?br />樣品測(cè)試前。初次試驗(yàn)后，可能需要調(diào)整樣品的稀釋度，以獲得
IgG濃度介于125 ng/ml和7.8 ng/ml之間，用于定量。
試驗(yàn)程序
使用前讓所有試劑達(dá)到室溫。如上所述制備試劑。將要使用的試管貼上標(biāo)簽
用于制備標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。如果整個(gè)微孔板不用于測(cè)試，去除多余的
從板架上剝開(kāi)并用干燥劑放入可密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下儲(chǔ)存。
步驟1：在其端部凸耳上標(biāo)記每個(gè)板條，以確保板條在
化驗(yàn)。
第2步：用移液管將200μl標(biāo)準(zhǔn)1-6移到重復(fù)的孔中。
第3步：用移液管將每個(gè)樣品200μl移到重復(fù)孔中。
第四步：用封板器蓋住微孔板，在室溫（18-25攝氏度）下培養(yǎng)30分鐘。
第5步：抽取每口井的內(nèi)容物，用1X洗板緩沖液清洗4次（見(jiàn)試劑制備）
部分）。沖洗時(shí)，用至少300μl的1X洗板緩沖液填充井內(nèi)，然后抽吸。執(zhí)行4個(gè)加注/吸氣循環(huán)。
在后一次清洗循環(huán)后，小心地敲擊吸水紙巾墊，*吸干盤(pán)子。繼續(xù)
敲擊直到?jīng)]有觀(guān)察到明顯的洗板緩沖液滴。
第6步：用移液管將100μL山羊IgG檢測(cè)抗體移到每個(gè)孔中。
第七步：用封板器蓋上封板，在室溫（18-25攝氏度）下孵育30分鐘。
步驟8：如步驟5所述，用1X洗板緩沖液清洗板4次。
第9步：用移液管將100μl基質(zhì)移入每個(gè)孔中。
步驟10：在室溫（18-25攝氏度）下培養(yǎng)皿30分鐘，不帶蓋子。藍(lán)色會(huì)在
含有山羊IgG的井。
第11步：移液管100 L L進(jìn)入每個(gè)井。從藍(lán)色到黃色會(huì)發(fā)生顏色變化。輕輕敲打微板
混合。
步驟12：在15分鐘內(nèi)，使用微板讀數(shù)讀取每孔450 nm的光密度。

預(yù)期結(jié)果
下面是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的示例，不應(yīng)用于計(jì)算實(shí)際樣本。可以觀(guān)察到變化
從實(shí)驗(yàn)室到實(shí)驗(yàn)室，由于移液器、培養(yǎng)箱溫度、平板讀取器等。

計(jì)算結(jié)果
測(cè)試有效性：
?0 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)的平均光密度必須低于0.200。
125 ng/ml的平均光密度必須高于1.000。
當(dāng)平均光學(xué)濃度為
密度值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)內(nèi)。
計(jì)算：
1。計(jì)算每組標(biāo)準(zhǔn)和稀釋樣品的平均光密度（OD）值。
2。使用線(xiàn)性圖紙或繪圖軟件，在Y軸上繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均OD值與
X軸上相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度。

三。通過(guò)這些點(diǎn)繪制適合擬合曲線(xiàn)以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的構(gòu)造將是
準(zhǔn)確。
第四章。用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)插值法測(cè)定各稀釋樣品的IgG濃度。
5.乘以用于稀釋每個(gè)樣品的稀釋系數(shù)，以確定原始樣品的IgG濃度。
樣本。
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