直擴型Taq DNA聚合酶(dNTP)說明書

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產(chǎn)品詳情

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Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq），是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經(jīng)基因工程改造，尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型。擴增片段的長度可達3 kb。延伸速度為1.0 kb/ min（72℃）。

特點

· 無外切酶活性，適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型；

· 熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過40 min；

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標記核苷酸；

· 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR。

濃度

2.5U/μl

活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個活性單位（U）。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

運輸與保存

-20℃保存 冰袋運輸

適用范圍

· 溶解曲線法基因分型/SNP測定；

· 菌落PCR；

· TA克隆PCR產(chǎn)物添加3’-dA；

· DNA熒光標記；

· 血液、組織樣本等直擴PCR。

應用舉例

以下反應舉例為50 μl標準PCR體系， 僅供參考。實際PCR條件應根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應條件。

*DNA template可參照如下標準（50 μl PCR體系）：

PCR反應條件

注意事項

· 不可用于Taqman探針法q-PCR。

· 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10^-5。

· 建議在冰上配置PCR 反應液后，再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR結(jié)果。

· 如進行PCR擴增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體系中的酶用量，以增加PCR擴增反應的特異性。

· 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應實例優(yōu)化而成，然而對某些PCR反應存在一個鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl₂/MgSO₄。

· 本產(chǎn)品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。