本文為 Epithelix 公司 3D 分化人源體外肺泡上皮模型（AlveolAir™）的用戶或新用戶指南。

一、AlveolAir™技術說明

以下是 AlveolAir™模型的簡要技術說明（非詳盡版）：

Epithelix 公司生產(chǎn)的 3D 體外組織（AlveolAir™）由人源原代肺泡上皮細胞重組而成，具有以下特性：

◆由低傳代（P2）的人源原代細胞構成。

◆每個組織均在標準 24 孔板的氣液界面（ALI）中培養(yǎng)，采用 Transwell 插入式培養(yǎng)皿（Epithelix 公司產(chǎn)品編號 EP24W，聚對苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜，孔徑 1µm），每個插入式培養(yǎng)皿置于 24 孔板的一個孔中。

圖 1：24 孔板及配套的 24 孔規(guī)格插入式培養(yǎng)皿

AlveolAir™模型為共培養(yǎng)模型：膜的頂側（暴露于空氣）為肺泡上皮細胞，膜的基底側（浸沒于培養(yǎng)基中）為內(nèi)皮細胞。

圖 2：AlveolAir™模型的阿利新藍 - 蘇木精 - 伊紅（Alcian blue H/E）染色橫截面

公司為 AlveolAir™模型定制了專用培養(yǎng)基以維持組織培養(yǎng)，訂購時請務必同時訂購培養(yǎng)基！

AlveolAir™模型可模擬體內(nèi)組織的多種特性：

◆即開即用，充分分化，功能完備，穩(wěn)定期長達 2 周（“使用期"）。注：總保質(zhì)期為 3 周，其中包含約 1 周的運輸時間。

◆在使用期內(nèi)，兩種細胞類型（1 型肺泡上皮細胞（AT1）和 2 型肺泡上皮細胞（AT2））的比例保持穩(wěn)定（見圖 3）。

◆可產(chǎn)生表面活性物質(zhì)（SP-x 型）。

◆存在緊密連接，跨上皮細胞電阻（TEER）在使用期內(nèi)保持穩(wěn)定（見圖 3）。

◆可釋放可溶性因子（細胞因子、趨化因子等）。

◆批次間重復性優(yōu)異。

◆適用于與 Epithelix 公司的原代肺泡巨噬細胞共培養(yǎng)。

圖 3：AlveolAir™模型的共聚焦顯微鏡圖像

二、訂購流程

本節(jié)概述組織訂購流程、常見問題及需注意的時間節(jié)點。

（一）庫存與供貨情況

AlveolAir™僅按需生產(chǎn)，自申請周起算，發(fā)貨周期為 4-6 周。

最小訂購量為 12 個單位（或 12 個 Transwell 插入式培養(yǎng)皿），無最大訂購量限制。

（二）訂購步驟

1.請先聯(lián)系上海起發(fā)說明需求、咨詢報價或供貨情況。

2.我們將提供正式報價并告知交貨時間表。重要提示：生產(chǎn)及發(fā)貨日期一經(jīng)確定，不可更改。

（三）其他信息

1.組織產(chǎn)品以標準 24 孔板為載體，置于營養(yǎng)凝膠中，包裝在含保溫塊的恒溫箱內(nèi)發(fā)貨。

2. 強烈建議客戶在收到組織后，先培養(yǎng) 1/2 天再進行實驗，以便組織從運輸過程中恢復（詳見第三節(jié)）。

三、接收與培養(yǎng)維護

收到組織后應如何操作？

（一）第 1 周 - 第 1 天

1.將組織接入培養(yǎng)環(huán)境（附錄 1：AlveolAir™接入培養(yǎng)步驟）。請記錄下最初寫在培養(yǎng)皿蓋子上的組織編號。

2.若部分組織的頂側出現(xiàn)培養(yǎng)基，可能是運輸過程導致。用連接真空泵的巴斯德吸管輕輕吸去培養(yǎng)基。

3. 將組織放入培養(yǎng)箱（37°C、100% 濕度、5% CO?）。

（二）第 1 周 - 第五天

更換培養(yǎng)基（附錄 2：更換培養(yǎng)基步驟）

（三）第 2 周 - 第一天

1.更換培養(yǎng)基（附錄 2：更換培養(yǎng)基步驟）

2.可選操作：進行 TEER 測量以質(zhì)控（附錄 3：Epithelix 公司 TEER 測量 protocol）

此時組織可在接下來的 2 周內(nèi)（穩(wěn)定期）自由用于實驗。歡迎分享您的使用體驗！

如需更多信息，請聯(lián)系上海起發(fā)

附錄 1：AlveolAir™接入培養(yǎng)步驟

操作流程

收到產(chǎn)品后，請按以下步驟操作：

1. 在超凈工作臺中打開一個新的 24 孔板，向每個孔中加入 0.7ml 預熱至 37°C 的 AlveolAir™專用培養(yǎng)基。

2.取下 AlveolAir™包裝的蓋子。

3.從包裝盒中取出培養(yǎng)板。

4. 將培養(yǎng)板轉移至超凈工作臺內(nèi)。

5.用鑷子將插入式培養(yǎng)皿從瓊脂中取出，轉移至步驟 1 中準備好的新培養(yǎng)板中。

6.將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱進行常規(guī)培養(yǎng)（37°C、100% 濕度、5% CO?）。

7. 每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基。

附錄 2：更換培養(yǎng)基步驟

培養(yǎng)基更換頻率：每 3 天（或更頻繁）更換一次，每次每孔加入 0.7ml 新鮮培養(yǎng)基；或每 2 天更換一次，每次每孔加入 0.5ml 新鮮培養(yǎng)基。

操作流程

1. 預熱足量的 AlveolAir™專用培養(yǎng)基至 37°C。

2.從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，在無菌超凈工作臺下取下蓋子。

3.用連接真空泵的移液器或巴斯德吸管吸去所有孔中的培養(yǎng)基。

4.向每個孔中加入 0.5ml 或 0.7ml 培養(yǎng)基，注意避免將培養(yǎng)基灑入插入式培養(yǎng)皿內(nèi)的組織上。

5.將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱進行常規(guī)培養(yǎng)（37°C、100% 濕度、5% CO?）。

附錄 3：Epithelix 公司跨上皮細胞電阻（TEER）測量 protocol

實驗材料

◆AlveolAir™專用培養(yǎng)基

◆EVOMX 上皮電壓電阻儀及電極（STX2）或同等設備

◆ 0.9% 氯化鈉溶液（貨號 1000090，Bichsel 公司）

◆乙醇（貨號 02855，F(xiàn)luka 公司）

操作流程

1. 向 AlveolAir™的頂側表面加入 200µl 預熱的專用培養(yǎng)基。

2.打開 EVOMX 儀器，將電極在 70% 乙醇中清洗，儀器屏幕應顯示：-1。

3.在生理鹽水（0.9% NaCl）中清洗電極，儀器屏幕應顯示：0.00。

4.將電極置于 AlveolAir™上，確保長電極桿穿過插入式培養(yǎng)皿的間隙并靠在孔底，短電極桿位于頂側表面的培養(yǎng)基中。儀器屏幕將顯示電阻值（Ω）。

5.輕輕吸去 AlveolAir™頂側表面的培養(yǎng)基，注意不要損傷上皮細胞。

電阻值（Ω）換算為 TEER 值（Ω?cm2）的公式

TEER (Ω.cm2)=(resistance value (Ω)-100 (Ω))x0.33 (cm2)

◆100 Ω = 膜的電阻值

◆ 0.33 cm2 = 上皮細胞的表面積

注：健康的 AlveolAir™組織 TEER 值應＞100 Ω?cm2。