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美國Activity Signaling公司重組抗Npas4兔單克隆抗體介紹

更新時間:2025-10-09      點擊次數(shù):753

一、基礎(chǔ)信息

1. 核心產(chǎn)品參數(shù)  

- 貨號:AS-AB18A-100(100μl)、AS-AB18A-300(300μl)  

-英文名:Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody

-中文名:重組抗Npas4兔單克隆抗體

- 品牌:Activity Signaling

- 宿主與類型:重組兔單克隆抗體,通過基因工程技術(shù)構(gòu)建,避免動物個體差異  

- 形態(tài)與保存:液體形式,1mg/ml濃度溶于PBS,短期4℃保存,長期-20℃分裝凍存  

2. 靶標(biāo)蛋白Npas4的生物學(xué)意義  

Npas4(Neuronal PAS Domain Protein 4)屬于bHLH-PAS轉(zhuǎn)錄因子家族,是神經(jīng)元活動依賴性的即早基因(IEG)產(chǎn)物。其表達(dá)具有高度神經(jīng)元特異性,僅在突觸活動激活后數(shù)分鐘內(nèi)迅速上調(diào),且持續(xù)時間短暫(約1-2小時),被認(rèn)為神經(jīng)元活性的黃金標(biāo)志物。Npas4的核心功能包括:  

- 調(diào)控突觸可塑性:通過激活BDNF等下游基因,平衡興奮性與抑制性突觸(E/I平衡),參與學(xué)習(xí)記憶和恐懼消退。  

- DNA損傷修復(fù):與NuA4復(fù)合物結(jié)合,在神經(jīng)元活動誘導(dǎo)的DNA斷裂位點募集修復(fù)蛋白,維持基因組穩(wěn)定性,延緩神經(jīng)退行性變。  

- 晝夜節(jié)律調(diào)節(jié):與BMAL1等時鐘基因互作,調(diào)控視交叉上核(SCN)對光信號的響應(yīng)。  

- 疾病關(guān)聯(lián):其異常表達(dá)與精神分裂癥、自閉癥、癲癇及阿爾茨海默病等密切相關(guān)。  

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二、作用原理

1. 抗體設(shè)計與制備  

該抗體通過重組DNA技術(shù)構(gòu)建,具體流程包括:  

- 抗原篩選:以Npas4蛋白C端保守區(qū)域(人源氨基酸597-802)為免疫原,確保跨物種識別(小鼠、大鼠、人類)。  

- 單B細(xì)胞克隆:從免疫兔外周血分離特異性B細(xì)胞,測序獲取抗體可變區(qū)基因。  

- 哺乳動物細(xì)胞表達(dá):將抗體基因?qū)際EK293細(xì)胞,通過無血清懸浮培養(yǎng)大規(guī)模生產(chǎn),避免動物源污染。  

- 嚴(yán)格純化:經(jīng)Protein A親和層析和SEC分子篩純化,純度>95%,內(nèi)毒素水平<0.1EU/μg。  

2. 作用機(jī)制  

抗體通過雙價Fab片段特異性結(jié)合Npas4蛋白的PAS結(jié)構(gòu)域,阻斷其與ARNT等伴侶蛋白的相互作用,從而抑制轉(zhuǎn)錄活性。該結(jié)合具有高度選擇性:  

- 種屬交叉反應(yīng)性:通過小鼠、大鼠及人類腦組織樣本驗證,在WB中均顯示單一87kDa條帶。  

- 亞細(xì)胞定位:免疫熒光(IF)實驗證實其與DAPI共定位,提示抗體可穿透細(xì)胞核膜,識別內(nèi)源性Npas4。  

- 功能驗證:在Npas4基因敲除(KO)小鼠中無信號,證明抗體無交叉反應(yīng)。

 

三、實驗痛點解決方案

1. 傳統(tǒng)抗體的局限性  

- 特異性不足:多克隆抗體因識別多個表位,易與PAS家族其他成員(如NPAS1、NPAS3)交叉反應(yīng),導(dǎo)致WB背景高或IHC假陽性。  

- 批次間差異:雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的小鼠單抗可能因細(xì)胞株遺傳漂變,導(dǎo)致不同批次效價波動。  

- 驗證困難:缺乏KO模型驗證的抗體難以排除非特異性結(jié)合,影響實驗結(jié)論可信度。  

2. 本產(chǎn)品的針對性優(yōu)化  

- KO驗證黃金標(biāo)準(zhǔn):在Npas4 KO小鼠腦裂解液中無信號,排除與其他bHLH-PAS蛋白的交叉反應(yīng)。  

- 多應(yīng)用場景適配:支持WB(1:500-1:2000)、IHC(1:100-1:500)、ICC/IF(1:200-1:1000),滿足從分子到組織水平的檢測需求。  

- 即用型設(shè)計:1mg/ml高濃度溶液可直接使用,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的抗體降解。  

- 兼容性擴(kuò)展:可與cFos、Arc等其他IEG抗體聯(lián)用,實現(xiàn)多標(biāo)記神經(jīng)元活動分析。

 

四、核心優(yōu)勢

1. 特異性與靈敏度的雙重提升  

- 高親和力結(jié)合:通過表面等離子共振(SPR)測定,抗體與Npas4的KD值達(dá)10?? M級,可檢測低至0.1ng的重組蛋白。  

- 背景信號抑制:在IHC實驗中,對小鼠睪丸等非表達(dá)組織無染色,證明其嚴(yán)格的組織特異性。  

2. 批次穩(wěn)定性與生產(chǎn)可靠性  

- 基因?qū)用嬉恢滦裕褐亟M抗體的DNA序列恒定,避免雜交瘤細(xì)胞突變導(dǎo)致的批次差異。  

- 規(guī)模化生產(chǎn)能力:哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)可實現(xiàn)快速擴(kuò)產(chǎn),供貨周期短至2周。  

3. 實驗效率優(yōu)化  

- 省時省力:無需預(yù)實驗優(yōu)化稀釋度,推薦起始濃度直接適用于大多數(shù)實驗條件。  

- 兼容多種檢測平臺:與HRP、Alexa Fluor等標(biāo)記二抗配合,支持化學(xué)發(fā)光、熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)。  

4. 應(yīng)用領(lǐng)域擴(kuò)展  

- 神經(jīng)科學(xué)研究:用于神經(jīng)元活動圖譜繪制、突觸可塑性機(jī)制解析及神經(jīng)退行性疾病模型驗證。  

- 藥物研發(fā):作為靶點驗證工具,評估候選化合物對Npas4通路的調(diào)控作用。  

- 高級成像技術(shù):與組織透明化試劑盒(如CLARITY)聯(lián)用,實現(xiàn)全腦3D成像。  


五、客戶群體與典型應(yīng)用案例

1. 核心用戶

- 神經(jīng)科學(xué)實驗室:研究突觸可塑性、學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)退行性疾病的機(jī)制。  

- 精神疾病研究機(jī)構(gòu):探索Npas4在自閉癥、抑郁癥等中的分子病理。  

- 藥物研發(fā)企業(yè):開發(fā)靶向Npas4通路的小分子抑制劑或基因療法。  

- 細(xì)胞生物學(xué)實驗室:研究神經(jīng)元活動誘導(dǎo)的基因表達(dá)動態(tài)變化。  

2. 代表性實驗方案  

- WB檢測神經(jīng)元激活:  

 - 樣本:小鼠海馬組織裂解液(35μg蛋白/泳道)。  

 - 條件:抗體稀釋1:1000,4℃孵育過夜,HRP標(biāo)記二抗1:5000,ECL顯影曝光30秒。  

 - 結(jié)果:在野生型小鼠中顯示清晰87kDa條帶,KO小鼠無信號。  

- IHC定位Npas4表達(dá):  

 - 樣本:大鼠腦冠狀切片(4%多聚甲醛固定)。  

 - 條件:抗體稀釋1:200,37℃孵育2小時,DAB顯色后蘇木精復(fù)染。  

 - 結(jié)果:特異性染色集中于海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞核,背景極低。  

- IF檢測原代神經(jīng)元激活:  

 - 樣本:體外培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元(經(jīng)KCl刺激30分鐘)。  

 - 條件:抗體稀釋1:500,與MAP2抗體共染,Alexa Fluor 488標(biāo)記二抗,激光共聚焦顯微鏡觀察。  

 - 結(jié)果:Npas4信號與MAP2陽性神經(jīng)元共定位,且刺激組熒光強(qiáng)度顯著高于對照組。


六、訂貨信息與技術(shù)支持

1. 產(chǎn)品規(guī)格與價格  

- 100μl裝:AS-AB18A-100

- 300μl裝:AS-AB18A-300

- 定制服務(wù):提供HRP、Biotin等標(biāo)記偶聯(lián)抗體,及大包裝批量采購優(yōu)惠。  

2. 訂購流程  

-供應(yīng)商:上海起發(fā)


七、總結(jié)

Anti-Npas4重組兔單克隆抗體(AS-AB18A系列)憑借重組技術(shù)的精準(zhǔn)性、嚴(yán)格的KO驗證及多場景兼容性,成為神經(jīng)科學(xué)研究的工具。其高特異性、批次穩(wěn)定性及實驗效率,不僅解決了傳統(tǒng)抗體的痛點,更助力研究者在神經(jīng)元活動機(jī)制、神經(jīng)退行性疾病及藥物研發(fā)領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展。選擇該抗體,即選擇了可靠、高效、前沿的實驗解決方案。  


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