世界*實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商Agrisera正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國代理，Agrisera 在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國科研客戶帶來的產(chǎn)品，的服務(wù)， 簽約Agrisera 就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲

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Agrisera公司于1980年在瑞典成立，Agrisera公司一直致力于發(fā)展科學(xué)研究所需的蛋白抗體研發(fā)與銷售，產(chǎn)品主要有：多種植物蛋白酶抗體，呼吸作用（線粒體）相關(guān)蛋白的多克隆抗體，Arabidopsis thaliana，Chlamydomonas reinhardtii ，以及其它一些較為稀有的蛋白抗體

ADGP | ADP-glucose pyrophosphorylase

ADGP | ADP-葡萄糖焦磷酸化酶

AS11 1739 | 克隆性：多克隆 | 主體：兔子 | 反應(yīng)物種：A.thaliana，C. reinhardtii，H. vulgare，Polytomella sp。，Z. mays

應(yīng)用實(shí)例

用蛋白質(zhì)提取緩沖液PEB（AS08 300）提取10μg來自擬南芥 （1），Hordeum vulgare （2），Zea mays （3）總蛋白的總蛋白。樣品用1X樣品緩沖液（NuPAGE LDS樣品緩沖液（Invitrogen），補(bǔ)充有50mM DTT并在70℃加熱5分鐘，并在加載前保持在冰上，蛋白質(zhì)樣品在NuPAGE4-12％Tris-雙凝膠（Invitrogen）LDS-PAGE，并使用槽轉(zhuǎn)移在PVDF上印跡1小時至1.5小時。在2％封閉試劑（GE RPN 2125; Healthcare）或溶解于20mM Tris的5％非脂肪乳中轉(zhuǎn)移后，在室溫攪拌下，將含有0.1％（v / v）吐溫-20（TBS-T）的137mM氯化鈉pH7.6培養(yǎng)1小時，將印跡以1：5000稀釋（封閉試劑）在室溫下攪拌1小時，傾出抗體溶液，短暫漂洗2次，然后用TBS-T在室溫下攪拌洗滌1×15分鐘和3×5分鐘，將印跡在二抗（抗兔IgG辣根過氧化物酶偶聯(lián)，推薦二抗AS09 602）稀釋t 在室溫下攪拌1?25 000封閉試劑1小時。印跡如上所述洗滌。使用TMA-6（Lumigen）檢測試劑根據(jù)制造商的說明書將印跡顯影5分鐘。使用CCD成像儀（FluorSMax，Bio-Rad）和Quantity One軟件（Bio-Rad）獲得印跡圖像。

進(jìn)行2D凝膠電泳以排除該抗體對Rubisco的交叉反應(yīng)性

將WT-Col-0 擬南芥葉子在液氮中冷凍，將可溶性蛋白質(zhì)在含有50mM HEPES，5mM NaCl和10mM MgCl 2的緩沖液中提取。通過非還原藍(lán)色天然PAGE（5-12.5％）分離10μg和17μg天然蛋白質(zhì)復(fù)合物，然后通過還原SDS-PAGE（15％用6M尿素）在第二維中進(jìn)一步分離，并吸印1小時至使用Höefer半干吸墨紙的PVDF膜。在室溫（RT）攪拌下，用TTBS中的2％牛奶將斑塊封閉3小時。將印跡在+ 4℃下以1：2000稀釋過夜孵育一次抗體。傾析抗體溶液，并在室溫下用TTBS在攪拌下將印跡洗滌3×5分鐘。將印跡在室溫下攪拌下，在1％乳/ TTBS中稀釋至1:25000的二抗（來自Agrisera AS09602的抗兔IgG 抗性馬匹蘿卜過氧化物酶）中溫育2小時。印跡在TTBS中在TTBS中洗滌3×5分鐘，并在室溫下用TBS洗滌1x5分鐘，并用ECL根據(jù)制造商的說明書顯影5分鐘。曝光時間為30秒。

來自芬蘭圖爾庫大學(xué)的Lauri Nikkanen感謝

藻類樣品的




蛋白質(zhì)印跡來自萊茵衣藻菌株CC-124 （1），衣藻衣藻菌株CC43-48（STA6）（2）和Polytomella sp。的總蛋白質(zhì)（40μg）Pringsheim 198.80 （3）在5-12％丙烯酰胺/ 6M尿素SDS-PAGE上分離，并印跡到硝酸纖維素膜上。在攪拌下，在含有5％低脂奶的T-TBS（0.1％Tween in Tris Buffer Saline）中，在室溫（RT）下1小時封閉印跡。將印跡在1：2 500的稀釋度下在*抗體中在攪拌下在室溫下孵育1小時。傾析抗體溶液，并在T-TBS，RT攪拌下將印跡洗滌兩次15分鐘。將印跡在稀釋至1:25000的二次抗體（山羊抗兔IgG，偶聯(lián)的辣根過氧化物酶，Agrisera，AS09602）中，在室溫下攪拌孵育 1小時。如上所述洗滌印跡并使用自制的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（Durrant，Nature 346：297,1990）進(jìn)行顯影。使用CCD成像儀（ImageQuant LAS4000）獲得印跡圖像。

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