世界*實驗材料供應(yīng)商 Cell Technology正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國代理， Cell Technology在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國科研客戶帶來的產(chǎn)品，的服務(wù)，簽約 Cell Technology就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲

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Cell Technology成立于1998年，致力于為研究院、生物技術(shù)公司及制藥企業(yè)的科研人員研發(fā)生產(chǎn)*的細(xì)胞功能研究用試劑與試劑盒。這些檢測試劑與試劑盒可以實現(xiàn)不破壞細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的情況下原位檢測細(xì)胞成分，研究細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的特定事件.Cell Technology發(fā)布了通過測定胞內(nèi)活性caspase及線粒體膜電位研究細(xì)胞凋亡的一系列試劑。隨著公司研發(fā)團(tuán)隊的持續(xù)努力，我們又推出了一系列高特異性的caspase檢測試劑，以及cathepsin檢測的試劑和ELISA試劑盒。目前Cell Technology提供的檢測試劑和ELISA試劑盒涵蓋Caspase、NOS、ROS、線粒體膜電位、信號通路和蛋白磷酸化等多個研究領(lǐng)域，產(chǎn)品倍各大高校、研究機(jī)構(gòu)、生物技術(shù)企業(yè)和制藥企業(yè)采用。

MitoCasp

同時雙參數(shù)測定：線粒體膜電位檢測和半胱氨酸蛋白酶（poly，3/7，8，9，1）活性。申請中*

產(chǎn)品描述

主要優(yōu)點

• 同時檢測線粒體膜電位和半胱天冬酶活性。
• 讀數(shù) - 流式細(xì)胞術(shù)，熒光讀板器，熒光顯微鏡。
• 可靠：產(chǎn)生定量和定性的結(jié)果。給出強(qiáng)烈的積極信號。
• 該試劑盒可以與其他抗體或污漬一起使用。
• 使用簡單：無需制作細(xì)胞裂解液或運(yùn)行Western印跡。
• 細(xì)胞滲透性試劑。

背景

Caspase檢測

Apoptosis is an evolutionarily conserved form of cell suicide, which follows a specialized cellular process. The central component of this process is a cascade of proteolytic enzymes called caspases. These enzymes participate in a series of reactions that are triggered in response to pro-apoptotic signals and result in cleavage of protein substrates, causing the disassembly of the cell (1).

Caspases have been identified in organisms ranging from C. elegans to humans. The mammalian caspases play distinct roles in apoptosis and inflammation. In apoptosis, caspases are responsible for proteolytic cleavages that lead to cell disassembly (effector caspases), and are involved in upstream regulatory events (initiator caspases). An active caspase consists of two large (~20 kD) and two small (~10 kD) sub units to form two heterodimers, which associate in a tetramer (2-4). As is common with other proteases, caspases are synthesized as precursors that undergo proteolytic maturation, either autocatalytically or in a cascade by enzymes with similar specificity (5).

線粒體膜電位檢測

線粒體膜電位的喪失是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志。線粒體通透性轉(zhuǎn)換是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要步驟。在此過程中，線粒體膜上的電化學(xué)梯度崩潰。認(rèn)為崩解是通過二聚化的Bax或激活的Bid，Bak或Bad蛋白質(zhì)在線粒體中形成孔而發(fā)生的。這些促細(xì)胞凋亡蛋白的激活伴隨著細(xì)胞色素c釋放到細(xì)胞質(zhì)中（11-14）。

測定原理

Caspase（poly，3/7，8，9，1）和線粒體膜電位檢測 - MitoCasp

半胱天冬酶特異性地識別必須包含天冬氨酸殘基的4個氨基酸序列（在其底物上）。該殘基是裂解反應(yīng)的目標(biāo)，其發(fā)生在天冬氨酸殘基（6）的羰基末端。可以通過免疫沉淀，使用半胱天冬酶特異性抗體的免疫印跡技術(shù)，或通過使用在半胱天冬酶切割時變成熒光的熒光底物來檢測半胱天冬酶。MitoCasp使用一種新方法來檢測活性半胱天冬酶（7-9）。該方法基于羧基熒光素（FAM）標(biāo)記的氟甲基酮（FMK）肽半胱天冬酶抑制劑。這些抑制劑是細(xì)胞可滲透的和無細(xì)胞毒性的。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，抑制劑就會與活性半胱天冬酶共價結(jié)合（10）。含有結(jié)合抑制劑的細(xì)胞可以通過流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡分析。

Cell Technology利用陽離子染料顯現(xiàn)線粒體膜電位（15-17）。陽離子染料是可滲透細(xì)胞的，并且在紅色區(qū)域具有強(qiáng)烈的熒光信號，并表現(xiàn)出低膜電位獨立（非特異性）結(jié)合和毒性。在健康細(xì)胞中，陽離子染料通過與DeltaPsi（膜電位）成比例的線粒體累積。在大多數(shù)細(xì)胞系中，陽離子染料在線粒體中的積累導(dǎo)致更高的熒光強(qiáng)度。在線粒體膜電位受損的凋亡細(xì)胞中，陽離子染料不累積在線粒體中，并且這些細(xì)胞表現(xiàn)出較低的熒光信號。可以同時分析利用這兩種試劑結(jié)合半胱天冬酶活性和線粒體膜電位。引文鑒定單域Bax-spec

Jurkat細(xì)胞用星形孢菌素刺激3小時（B）或DMSO（A）。然后按照方案用MitoCasp試劑盒對細(xì)胞進(jìn)行染色。然后將細(xì)胞洗滌兩次并通過流式細(xì)胞術(shù)分析：實例：488nm Em：FL1和FL2。

圖A.健康細(xì)胞顯示出強(qiáng)烈的紅色熒光，表明完整的線粒體并且沒有綠色熒光，表明沒有活性半胱天冬酶。

圖B：凋亡細(xì)胞顯示紅色熒光損失（y軸），表明線粒體膜電位損失，正綠色熒光（x軸）表明活性半胱氨酸蛋白酶。

Product Name: MitoCaspTM

Catalog # MITCAP100-1 and 100-2, MITCAP200-1 and 200-2, MITCAP300-1 and 300-2, MITCAP400-1 and 400-2, MITCAP600-1 and 600-2

Components:

Part# 4015: Mitochondria Membrane Potential Dye (Cationic Dye)

Part# 3032: 1X Dilution Buffer

Part# 8001: FAM-VAD-FMK (Poly Caspase)

Part# 3028: 10 X Wash Buffer

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