avacta重組抗體專家，avacta使命是通過發(fā)展我們的一種*Affimer安全和有效的藥物來塑造醫(yī)學的未來®平臺，并提供了強大的Affimer ®用于研究和診斷試劑

重組抗體表達是利用基因重組技術(shù),將抗體序列轉(zhuǎn)入表達載體并在表達系統(tǒng)中表達,終純化得到重組抗體.相較于傳統(tǒng)的抗體制備方法,利用基因重組技術(shù)表達抗體具有諸多優(yōu)勢

周期短:重組抗體生產(chǎn)周期為6~8周,而傳統(tǒng)制備方法需4~6個月;

可控性高:抗體的基因是確定的,因此實驗的重復性好且批次間差導小;

免疫原性低:不需要免疫動物,抗體不會產(chǎn)生鼠源性,不容易激起人體的免疫反應;

基因工程改造:利用基因重組技術(shù),可以實現(xiàn)抗體片段的生產(chǎn)以及鼠源單抗的人源化改造。

 Anti-Human SUMO1 Affimer Reagent (HS1-A1) Biotinylated

抗人SUMO1 Affimer試劑（HS1-A1）生物素化

目錄代碼AVA00024-

規(guī)格100μg

Affimer ® （HS1-A1）到人力SUMO1生物素化

一般  

名稱 抗人SUMO1 Affimer試劑（HS1-A1）生物素化

目錄代碼 AVA00024生物素

概觀  

克隆ID HS1-A1

尺寸（μg） 100

經(jīng)測試的應用程序 共免疫沉淀，ITC，Western Blotting

標簽 C-term 6His

共軛 生物素化

屬性  

形成 液體

存儲說明 短期使用，儲存在4°C。我們建議在-20°C下長期等分和儲存。Affimers通常不受3-4次冷凍/解凍循環(huán)的影響

緩沖 100mM磷酸鈉，75mM氯化鈉，0.02％Sodium Azide，pH7.4

純度 > 95％

凈化方法 IMAC隨后進行脫鹽

克隆 單克隆

目標  

目標 人類SUMO1

物種反應性 人的

目標Uniprot ID P63165

目標功能

泛素樣蛋白質(zhì)，可以作為單體或賴氨酸連接的聚合物共價附著在蛋白質(zhì)上。通過異肽鍵與其底物的共價連接需要E1復合物SAE1-SAE2的預先活化和與E2酶UBE2I的連接，并且可以通過E3連接酶如PIAS1-4，RANBP2或CBX4促進。這種對蛋白質(zhì)賴氨酸殘基的翻譯后修飾在許多細胞過程中起著至關(guān)重要的作用，例如核轉(zhuǎn)運，DNA復制和修復，有絲分裂和信號轉(zhuǎn)導。例如，涉及將RANGAP1靶向核孔復合蛋白RANBP2。聚合SUMO1鏈也易受多泛素化的影響，其作為蛋白酶體降解修飾蛋白的信號。也可能調(diào)節(jié)參與腭發(fā)育的基因網(wǎng)絡(luò)。

Affimers的設(shè)計在許多方面比抗體表現(xiàn)更好。

研究領(lǐng)域 Cell Signaling，UPS

此Affimer僅在下面詳述的應用程序中進行了測試。應用說明包括推薦的起始濃度，但是，宜條件應由終用戶確定。

等溫滴定量熱法

克隆HS1-A1顯示出對人SUMO1特異性（K d = 97nM），但通過等溫滴定量熱法與人SUMO2沒有相互作用。

免疫共沉淀

用攜帶靶標（GFP，GFP-SUMO1或GFP-SUMO2）和Affimer（具有FLAG標簽）的質(zhì)粒（共）轉(zhuǎn)染HEK293T細胞48小時。將細胞在PBS中洗滌，并將蛋白質(zhì)在含有50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1％NP-40和1x蛋白酶抑制劑混合物（Roche）的1ml裂解緩沖液中在冰上提取15分鐘，并通過在12,000℃離心澄清。 xg 10分鐘，4°C。將裂解物與GFP-Trap（Chromotek）一起溫育，用于GFP標記物質(zhì)的共免疫沉淀。免疫沉淀的蛋白質(zhì)在Laemmli緩沖液中洗脫并進行免疫印跡分析。如標記但紅色框，Affimer（HS1-A1）在GFP-SUMO1存在下共沉淀，但不存在GFP-SUMO2。

Western Blotting

SDS-PAGE和印跡

在Bolt 4-12％Bis-Tris Plus凝膠（Life Tech）上分離蛋白質(zhì)樣品（每孔100ng），并使用iBlot2（Life Tech）印跡到硝酸纖維素上。

閉塞

使用1x TBS + 3％脫脂奶粉（1小時，RT°C，400rpm）封閉膜

洗1

3 x 5ml的1xTBS-T（0.05％吐溫-20）

Affimer孵化

1 x TBS + 3％脫脂奶粉中5μg/ ml（16 h，4°C，400 rpm）

洗2

3 x 5ml的1xTBS-T（0.05％吐溫-20）

發(fā)現(xiàn)

兔抗6xHis HRP結(jié)合物，在1 x TBS + 3％脫脂奶粉中1 / 5,000稀釋（1小時，RT°C，400 rpm）

洗3

3 x 5ml的1xTBS-T（0.05％吐溫-20）

基質(zhì)

ECL（Amersham）

只有當Affimer存在時才會形成可檢測的復合物：Affimer識別免疫球蛋白，并且通過Affimer上的6xHis標簽介導復合物的檢測。抗-6xHis結(jié)合劑不檢測不存在Affimer的膜4上的IgG。

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