Clodronate Liposomes體內巨噬細胞清除試劑

去除巨噬細胞是研究巨噬細胞功能的重要方法。巨噬細胞可吞噬 clodronate Liposome， 在溶酶體的作用下，clodronate 可釋放出來，當其達到一定濃度時，可引起巨噬細胞的凋亡， 從而去除巨噬細胞。clodronate Liposome 可局部注射去除注射部位臨近的巨噬細胞，如肺、 膝關節、腫瘤局部和腦等；也可尾靜脈或腹腔注射去除循環途徑中的單核巨噬細胞，如肝臟 和脾臟中的巨噬細胞。

1. 脂質體的準備 可以自己制備或者購買商品話的脂質體 荷蘭clodronaiposomes

2. 脂質體的體內注射 隔日尾靜脈注射 200ul clodronate liposome，根據實驗要求制定注射日程。通過免疫組化 或流式檢測巨噬細胞的去除效率。

尾靜脈注射方法： 尾靜脈注射方法：

 1. 將小鼠放在倒扣的飯盒內，從孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2條動脈和3條靜脈，2條動脈分別在尾部的背側面和腹側面，3 條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩側的靜脈；

2. 將紗布浸泡于約 70 度的溫水中，拿出后包裹尾巴，以達到使尾部血管擴張及軟化表皮 角質的目的；

3. 行尾部靜脈注射時，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出約 2cm 一段，使皮膚緊張， 靜脈更為充盈，右手持 1ml 針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于 30°角)，從尾巴的下 1/4 處進針，開始注入藥物時應緩慢，仔細觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現，說明 已刺入血管，可正式注入藥物。

4. 有的實驗需連日反復尾靜脈注射給藥，注射部位應盡可能從尾端開始，按次序向尾根部 移動，更換血管位置注射給藥。拔出針頭后，用棉球按住注射部位輕壓 1-2min，止血。 

FAQ:

Q:收到Clodronate liposomes后該如何操作？

A:收到氯磷酸脂質體后，如果不能馬上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止凍存！使用時作為原液使用，不能進行稀釋。脂質體很容易發生沉淀，建議使用之前輕輕混勻，另外4℃的氯磷酸脂質體不能馬上使用，需要恢復到室溫才能進行注射。

Q: Clodronate liposomes能否用于體外巨噬細胞清除？

A:產品可以用于體外巨噬細胞的清除，但是這種方法比較適合體內實驗。主要是由于在體外培養過程中，從死亡細胞釋放的氯磷酸或者是從脂質體中“滲漏”出來氯磷酸，會一直存在于培養基中，但是在體內，氯磷酸的半衰期很短，很快就會被腎臟清除。雖然游離的氯磷酸不會進入細胞也不會進入脂質體，但是一旦他們在培養基中積累就會慢慢地進入細胞中。

Q:在靜脈注射Clodronate liposomes后動物很快就死亡了，是什么原因？

A:一方面有可能是動物注射了不均一的脂質體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。脂質體在體外一段時間后會發生沉降。如果在很長一段時間內需要一次注射多只動物，那么脂質體便會在注射器中發生沉淀，形成不均一懸液，這樣一來，*只注射的計量與zui后一只注射的計量就會發生明顯的變化。另外一方面有可能是脂質體剛從冰箱取出后，沒有恢復到室溫。

Q:動物在注射Clodronate liposomes后幾天就死亡了？

A：這個可能是受到細菌的污染，體內清除巨噬細胞后會增加例如病毒粒子，細菌或者酵母感染的幾率。

Q:靜脈注射Clodronate liposomes后大鼠脾臟/肝臟中的ED1+細胞并沒有*消失？

A：大鼠中成熟的巨噬細胞呈現ED1和ED2雙陽性，但是有一些沒有吞噬功能的或者吞噬作用小的前體細胞也是ED1+，但是呈現ED2-。因此，所有ED2+的細胞都可以被*清除，但是ED1+的細胞卻只能被部分清除，清除的比率取決于前體/成熟巨噬細胞的比例。

Q: Clodronate liposomes沒有達到期望的效果？

A：氯磷酸脂質體都是大批量的生產，每批次都會對氯磷酸的濃度以及一些可能的污染物進行檢測，確保無誤后才會銷售給客戶。另外，脂質體容易收到溫度的影響。正確的運輸和儲存方式是4~8℃，懸液既不能被凍存，也不能被加熱超過30℃。自收到貨物起，需要在3個月內使用完，不然有可能會影響使用的效果。

Q:在靜脈注射時，能不能增加注射的體積？

A：靜脈注射時需要依據動物的體重，不能超過0.1ml/10mg，但是進行腹腔注射可以適當的增加注射的體積。皮下注射需要根據注射位點的容量進行決定。